免疫組化實驗操作之組織石蠟切片制作
更新時間：2015-11-18 點擊次數(shù)：1803次組織經(jīng)石蠟包埋后制成的蠟塊，用切片機(jī)制成切片的過程為石蠟切片法。石蠟切片法現(xiàn)使用的切片機(jī)有平推式切片機(jī)、輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)兩種。
一、平推式切片機(jī)石蠟切片法
1．切片前的準(zhǔn)備：清洗過的載物片(或免清洗的)，毛筆，鉛筆，小竹片，水槽，霧化器，攤片器，切片刀，刀架。
2．切片制作步驟：刀架的粗削部放在頭端，在切片機(jī)刀架部夾緊。組織蠟塊裝在切片機(jī)蠟塊固定器上夾緊。右手握切片機(jī)刀頭運(yùn)動手柄，左手轉(zhuǎn)動切片機(jī)蠟塊運(yùn)動 旋鈕。先轉(zhuǎn)動此鈕，后平拉刀架運(yùn)動手柄，進(jìn)行粗削，直至組織切全。停止，將刀架移到細(xì)削部，輕輕轉(zhuǎn)動蠟塊運(yùn)動旋鈕，后拉刀架手柄進(jìn)行細(xì)削。削至組織光滑發(fā) 亮，右手拿毛筆掃凈刀架及蠟塊上的蠟屑，組織屑，放下毛筆，再用右手握住刀架運(yùn)動手柄。左手拿小竹片，用竹片頭蘸一下水槽中的水。左手中指搬動薄切鈕，霧 化器的噴頭對準(zhǔn)蠟塊。右手拉刀架運(yùn)動手柄。左手中的小竹片在蠟塊空白處等待切片刀切起蠟片一端挑起粘住，隨切片刀移動，完整的蠟片切出后，粘在竹片上，移 入水槽中，撈片，放在攤片器上攤片5 min后，裝在染色籃上，放入75℃烤箱烤片。
3．注意事項
(1)無冷臺的病理科可以將包埋好的組織蠟塊放到冰箱內(nèi)，但如放置時間過久溫度太低切片時蠟塊會產(chǎn)生熱漲，切片會厚，要多切幾張，后面的片子就會薄一些。
(2)霧化器是去除靜電的，但也有增加切片厚度的缺陷。尤其霧氣大時，使蠟塊熱漲，厚度增加更明顯。為了保證切片厚度，一定要控制好風(fēng)力、霧力。霧化器使用自來水，水位控制在30刻度。
(3)切片機(jī)使用前一定要檢查各部位情況。先檢查固定器是否固定在你所要的厚度上。切片機(jī)刀架角度與蠟塊呈90。。從蠟塊右上角進(jìn)刀。
二、輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)石蠟切片法
1．切片前的準(zhǔn)備：清洗過的載玻片、毛筆、鉛筆、盛有30％乙醇的小燒杯、牙科鑷、展片槽、切片機(jī)、一次性刀片及刀架。檢查輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)切片厚度的鈕是否固定于你所要切的厚度刻度上。
2．切片制作步驟：將放在－5℃冷臺上的組織蠟塊裝在切片機(jī)固定器上夾緊，空白蠟多的一端在上。將切片刀固定一端為粗削部，左手旋動蠟塊推動器，右手旋動 切片機(jī)把手。先搖動蠟塊推動器，后搖動切片機(jī)機(jī)頭半輪上下運(yùn)動，進(jìn)行粗削，一進(jìn)一削，直至組織切全。而后將切片刀移至另一端進(jìn)行細(xì)削，削至蠟塊光滑平整。 用毛筆將其刀架、蠟塊面清掃干凈。左手持毛筆，右手整輪轉(zhuǎn)動切片機(jī)手柄進(jìn)行切片。將毛筆貼于刀架背不時轉(zhuǎn)動，輕輕托起連片的蠟片。右手停止轉(zhuǎn)動機(jī)頭，換持 牙科鑷，夾住連片蠟片頭端，放入盛30％乙醇的燒杯內(nèi)。用牙科鑷去除不好的蠟片。放入水溫45～50℃水槽內(nèi)展片后撈片。
3．注意事項
(1)無冷臺的病理科可以將包埋好的組織蠟塊放到冰箱內(nèi)，但如放置時間久溫度太低注意切片時蠟塊會產(chǎn)生熱漲，切片會厚，要多切幾張，后面的片子就會薄一些。
(2)為了能夠連片，蠟塊兩端要有空白蠟。多的一端放在上面。
(3)展片槽溫度不要過高，有時會有小組織塊散漂在水面上造成污染?？捎檬旨堈鄢膳c水槽寬度相同水面行走，將組織屑撈走。
