內(nèi)源性一氧化碳（CO）-測(cè)試盒

（測(cè)血清、血漿）

一、測(cè)定原理：

根據(jù)碳氧血紅蛋白（HbCO）和還原血紅蛋白（Hb）吸收

光譜的差異，選擇 HbCO 吸光度之差而 Hb 吸光度之差為

零的兩個(gè)波長(zhǎng)，應(yīng)用雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定樣本在這兩個(gè)波

長(zhǎng)下的吸光度差值（△OD），再通過標(biāo)準(zhǔn)曲線求出 HbCO 百分

濃度，代入公式計(jì)算出內(nèi)源性一氧化碳（CO）含量。

二、試劑組成及配制：（100T/50 樣）

試劑一：溶血?jiǎng)?/span>100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：緩沖液，100mL×3 瓶，4℃保存。

試劑三：碳氧血紅蛋白測(cè)定粉劑×10 瓶，4℃避光密封保存。

碳氧血紅蛋白測(cè)定工作液的配制：臨用前，往每瓶測(cè)定粉劑

中加入 23mL 試劑二緩沖液，加蓋顛倒混合，使

溶解，現(xiàn)用現(xiàn)配，用多少配多少，2 小時(shí)內(nèi)用完，用

黑袋注意避光。

試劑四：制作 HbCO 百分曲線用的還原粉劑×6 支，4℃避光

密封保存。

試劑五：血紅蛋白 Hb 測(cè)定濃縮液，1mL×2 支，4℃避光密封

保存。

血紅蛋白 Hb 測(cè)定應(yīng)用液的配制：臨用前將濃縮液用蒸餾水 1∶

99 稀釋，即 100 倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。配好的試劑 2～

8℃避光保存，可存放 1 個(gè)月以上。

三、操作步驟：

1、血清（漿）中血紅蛋白 Hb 測(cè)定及計(jì)算：

取 0.05mL 樣本（血清 、血漿）與 2.5mL 的血紅蛋白測(cè)

定應(yīng)用液（即將試劑五的濃縮液進(jìn)行 100 倍稀釋），混勻，

靜置 5 分鐘后，1cm 光徑蒸餾水調(diào)零，540nm 測(cè)定各管吸光

度值。

血紅蛋白含量的計(jì)算：

血紅蛋白含量（g/L）= Α540 ×367.7

2、 樣本前處理：

①、制備溶血液：取抗凝全血 0.01mL，加入試劑一溶血?jiǎng)?/span>

1.2mL 混勻，靜置 5 分鐘，使溶血。

②、制備測(cè)定樣本：取制備好的溶血液 0.1mL，加待測(cè)血漿

0.1mL，混合后制備成測(cè)定樣本。

③、制備對(duì)照樣本：取制備好的溶血液 0.1mL，加待測(cè)雙蒸

水 0.1mL，混合后制備成對(duì)照樣本。

四、碳氧血紅蛋白（HbCO）百分濃度曲線：

【可自行制作 HbCO 百分濃度曲線，也可參照本所提供的 HbCO

百分濃度曲線】

〇 飽和碳氧血紅蛋白與飽和還原血紅蛋白的制備

1、取不吸煙健康人肝素抗凝全血 0.01mL，加入試劑一溶血液

1.2mL 混勻，靜置 5 分鐘使溶血。

2、從中取 2 份，每份 0.2mL，加入到兩支具塞試管中，再分

別加入 2.3mL 試劑二緩沖液，混勻。

3、在通風(fēng)櫥內(nèi)，向其中一支試管里通純一氧化碳（CO），連

續(xù)通 15 分鐘，再通入氮?dú)?20 分鐘，得到飽和 HbCO 溶液。

4、再向另一支試管通氧氣（O2），連續(xù)通 20 分鐘，得到飽和

HbO2溶液。

五、檢測(cè)意義：

一氧化碳（carbon monoxide，CO）是與一氧化氮（NO）

極相似的小分子氣態(tài)物質(zhì)。90 年代以來(lái)的大量研究揭示，生

物體內(nèi)源性CO不僅作為一種新型的神經(jīng)遞質(zhì)參與中樞神經(jīng)系

統(tǒng)的信息傳遞，還具有舒張血管、抑制血管平滑肌和血管內(nèi)

膜增殖、抑制血小板聚集、調(diào)節(jié)體內(nèi)激素分泌、抑制細(xì)胞凋

亡等多種生物學(xué)功能，在機(jī)體多種生理及病理狀態(tài)中發(fā)揮重

要的作用。

六、計(jì)算公式：

〇 碳氧血紅蛋白百分濃度（HbCO%）的計(jì)算：

通過分別測(cè)定 568nm 與 581nm 的吸光度，計(jì)算△OD

（A568-A581）的吸光度值差。再由標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過回歸

方程計(jì)算出碳氧血紅蛋白百分比濃度，即 HbCO%。

【注 1】如不直接制作百分濃度曲線，也可參照本所提供

的百分濃度曲線，回歸方程為：

y = 0.822x + 0.001

x 即為△OD（A568-A581）的吸光度值，y 即為碳氧血紅蛋白

百分比濃度。

HbCO%=[ 0.822×△OD（A568-A581）+0.001 ]×

【注 2】 A568 為 HbCO 吸光度之差的波長(zhǎng)；A581為 Hb 吸

光度之差為零的波長(zhǎng)。

〇 血清/血漿中 Hb 的測(cè)定步驟及計(jì)算公式：

取 0.05mL 樣本（血清/血漿）與 2.5mL 的血紅蛋白測(cè)定應(yīng)

用液（即將試劑五的濃縮液進(jìn)行 100 倍稀釋），混勻，靜置 5

分鐘后，1cm 光徑蒸餾水調(diào)零，波長(zhǎng) 540nm 測(cè)定各管吸光度

值。

血紅蛋白含量的計(jì)算：

血紅蛋白含量（g/L）= Α540 × 73.54

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